1. Класификација
Електрофорезата со гел е поделена на вертикални типови (вклучувајќи гелови со колони и гелови за плочи) и хоризонтални типови (главно гелови со плочи) (Слика 6-18). Општо земено, вертикалното раздвојување е малку супериорно во однос на хоризонталното, но хоризонталната подготовка на гел има најмалку четири предности: има поддршка под целиот гел, што овозможува употреба на агароза со ниска концентрација; можно е да се подготват агарозни гел плочи со различни спецификации; подготовката на гел и вчитувањето на примерокот се попогодни; комората за електрофореза е лесна за конструирање и исплатлива. Бидејќи хоризонталната електрофореза се изведува со гел-плоча од агароза целосно потопена околу 1mm под површината на пуферот за електрофореза, таа се нарекува и потопена електрофореза.
Резервоар за електрофореза DYCP-31DN за електрофореза на гел агароза
2.Баферски систем
Во сепарацијата на нуклеинската киселина, повеќето системи прифаќаат континуирани системи. Најчесто користените пуфери за електрофореза вклучуваат TBE (0,08mol/L Tris·HCl, pH 8,5, 0,08mol/L борна киселина, 0,0024mol/L EDTA) пуфер и THE (0,04mol/L Tris·HCl, pH 7,8, 0,02mol натриум ацетат, 0,0018mol/L EDTA) пуфер. Овие пуфери обично се подготвуваат како 10x масни раствори и се разредуваат до потребната концентрација кога се во употреба. Стапките на миграција на линеарната и кружната ДНК во агарозен гел варираат во зависност од употребениот пуфер. Во тампонот THE, стапката на миграција на линеарната ДНК е поголема од онаа на кружната ДНК, додека кај TBE пуферот е точно спротивното.
3.Подготовка на гел од агароза
(1) Подготовка на хоризонтален гел од агароза
(а) Подгответе ја потребната концентрација на агарозен гел користејќи 1x пуфер за електрофореза.
(б) Загрејте ја агарозата до целосно растворање или во зовриена водена бања, на магнетна мешалка или во микробранова печка. Разладете го растворот на агароза на 55°C и додадете боја на етидиум бромид (EB) до конечна концентрација од 0,5 μg/ml.
(в) Запечатете ги рабовите на стаклените или акрилните плочи со мала количина гел од агароза, додадете чешел и поставете ги забите на чешелот околу 0,5-1,0 mm над плочата.
(г) Непрекинато истурајте го растворот од стопениот гел од агароза во калапот за стакло или акрилна плоча (дебелината зависи од волуменот на примерокот на ДНК), избегнувајќи внесување на воздушни меури. Оставете го природно да се зацврсти на собна температура.
(д) Внимателно отстранете го чешелот по целосно зацврстување. Додадете соодветна количина пуфер за електрофореза во резервоарот за гел, осигурувајќи се дека гел-плочката е потопена околу 1 mm под површината на пуферот за електрофореза.
(2) Подготовка на вертикален агарозен гел
(а) Отстранете ги маснотиите или остатоците од стаклените плочи со миење со етанол.
(б) Поставете ги разделувачите помеѓу предните и задните брани, порамнете ги рабовите на таблите со предните и задните брани и прицврстете ги со стеги.
(в) Додадете 2% агароза во 1x пуфер помеѓу рабовите на плочите за да се формира агарозен приклучок висок 1 cm на дното на комората за лиење гел.
(г) Истурете го стопениот гел од агароза во саканата концентрација, подготвен во 1x пуфер, во комората за гел до 1 cm под врвот.
(д) Вметнете го чешелот, избегнувајќи да заглавите воздушни меури под забите на чешелот. Понекогаш, на забите на чешелот може да се појават брчки за време на ладењето со гел со агароз; во такви случаи, едноставно додадете малку растопена агароза на врвот за да се зацврсти.
(ѓ) Отстранете го чешелот. За да спречите истекување на пуферот во отворот за полнење, запечатете ја врската помеѓу плочата за гел од агароза и комората за електрофореза со 2% агароза и додадете ја потребната количина пуфер.
(е) Додадете 1x пуфер за електрофореза во комората за гел.
(ж) Внимателно внесете ги примероците на ДНК на гелот од агароза под пуферот.
Повеќе информации за основните знаења за електрофорезата со гел агароза ќе споделиме следната недела. Посакувам овие информации да бидат корисни за вашиот експеримент.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) е специјализирана за производство на инструменти за електрофореза повеќе од 50 години со нашиот сопствен професионален технички тим и центар за истражување и развој. Имаме сигурна и комплетна производна линија од дизајн до инспекција и магацин, како и маркетинг поддршка. Нашите главни производи се ќелија за електрофореза (резервоар/комора), напојување со електрофореза, сино LED трансилуминатор, УВ трансилуминатор, гел систем за слика и анализа итн.
Сега бараме партнери, добредојдени се и OEM резервоарот за електрофореза и дистрибутерите.
Доколку имате некаков план за купување на нашите производи, не двоумете се да не контактирате. Можете да ни испратите порака на е-пошта[заштитена е-пошта]или[заштитена е-пошта], или ве молиме јавете ни се на +86 15810650221 или додадете Whatsapp +86 15810650221, или Wechat: 15810650221.
Скенирајте го QR-кодот за да го додадете на Whatsapp или WeChat.
Време на објавување: Декември-07-2023 година