Експеримент за електрофореза на хемоглобин

Принцип на експеримент

Електрофорезата на хемоглобин има за цел да открие и потврди различни нормални и абнормални хемоглобини.

Поради различните полнежи и изоелектрични точки на различни типови на хемоглобин, во одреден pH тампон раствор, кога изоелектричната точка на хемоглобинот е пониска од pH на пуферскиот раствор, хемоглобинот носи негативен полнеж и мигрира кон анодата за време на електрофорезата. Спротивно на тоа, хемоглобинот со позитивен полнеж се движи кон катодата.

Под одреден напон и по одредено време на електрофореза, хемоглобините со различни полнежи и молекуларни тежини покажуваат различни насоки и брзини на миграција. Ова овозможува одвојување на различни зони, а последователната колориметриска или електрофоретска скенирана анализа може да се изврши на овие зони за да се измери различните хемоглобини. Најчесто користен метод е електрофореза на мембрана на целулоза ацетат со pH 8,6.

Во цитоплазмата, групите на етилен гликол (CHOH-CHOH) присутни во гликоген или полисахаридни супстанции (како што се мукополисахариди, мукопротеини, гликопротеини, гликолипиди итн.) се оксидираат со периодична киселина и се претвораат во алдехидни групи (CHO-CHO). Овие алдехидни групи се комбинираат со безбојниот виолетово-црвен Шиф реагенс, формирајќи пурпурно-црвена боја која се депонира таму каде што се присутни полисахариди во клетката. Оваа реакција е позната како периодично киселинско-шифово (PAS) боење, порано наречено боење со гликоген.

Експеримент метод

Материјали:Целулоза ацетатмемБран, апарат за електрофореза(DYCP-38C и напојување DYY-6C ), Супериорна алатка за вчитување примероци(пипета), спектрофотометар, колориметриски кивети, бафери.

Бафер:

(1) pH 8,6 TEB пуфер: измерете 10,29 g Tris, 0,6 g EDTA, 3,2 g борна киселина и додадете дестилирана вода до 1000 ml.

(2) Боратен пуфер: Измерете 6,87 g боракс и 5,56 g борна киселина и додадете дестилирана вода до 1000 ml.

Постапка:

Pрепарација на раствор на хемоглобин

Земете 3 ml крв што содржи хепарин или натриум цитрат како антикоагулант. Центрифугирајте на 2000 вртежи во минута 10 минути и фрлете ја плазмата. Измијте ги црвените крвни зрнца три пати со физиолошки раствор (750 вртежи во минута, 5 минути центрифугирање секој пат). Центрифугирајте на 2200 вртежи во минута 10 минути и фрлете го супернатантот. Додадете еднаква количина на дестилирана вода, а потоа додадете 0,5 пати поголем волумен на јаглерод тетрахлорид. Протресете енергично 5 минути, а потоа центрифугирајте со 2200 вртежи во минута 10 минути за да се собере горниот раствор на Hb за подоцнежна употреба.

Натопување на мембраната

Исечете ја мембраната на целулоза ацетат на ленти со димензии 3 cm × 8 cm. Потопете ги во пуфер со pH 8,6 TEB додека не се целосно заситени, потоа отстранете ги и исушете ги со филтер-хартија.

Анѓелковиќ

Користете пипета за да забележите 10 μl од растворот на хемоглобин вертикално на мембраната на целулоза ацетат (грубата страна), околу 1,5 cm од работ.

Електрофореза

Истурете го растворот на боратен пуфер во комората за електрофореза. Ставете ја мембраната на целулоза ацетат со точкастата страна на катодниот крај на комората. Работете на 200 V 30 минути.

Елуција

Исечете ги зоните HbA и HbA2, ставете ги во посебни епрувети и додадете 15 ml и 3 ml дестилирана вода, соодветно. Нежно протресете за целосно испуштање на хемоглобинот, а потоа измешајте.

Колориметрија

Нулете ја апсорпцијата користејќи дестилирана вода за растворот за елуирање и измерете ја апсорпцијата на 415 nm.

Пресметка

HbA2(%) = Апсорпција на HbA2 цевка / (Апсорпција на HbA цевка × 5 + Апсорпција на HbA2 цевка) × 100%

Пресметка на експериментални резултати

Референтен опсег за pH 8,6 TEB пуфер целулоза ацетат Електрофореза: HbA > 95%, HbA2 1%-3,1%

Белешки

Времето на електрофореза не треба да биде премногу долго. Мембраната на целулоза ацетат не треба да се исуши за време на електрофореза. Запрете ја електрофорезата кога HbA и HbA2 се јасно одвоени. Продолжената електрофореза може да предизвика дифузија на лентата и заматување.

Избегнувајте да користите премногу примерок. Прекумерната течност на хемоглобин може да доведе до одвојување на лентата или недоволно боење, што резултира со лажно покачени нивоа на HbA.

Спречете ја контаминацијата на мембраната на целулоза ацетат со протеини.

Струјата не треба да биде премногу висока; во спротивно, хемоглобинските ленти може да не се одвојат.

Секогаш вклучувајте примероци од нормални поединци и неопходни познати абнормални хемоглобини како контроли.

Beijing Liuyi Biotechnology го произведува професионалниот резервоар за електрофореза за електрофореза на хемоглобин што е моделDYCP-38CРезервоар за електрофореза со мембрана на целулоза ацетат, а достапни се два модели на напојување со електрофореза за мембранскиот резервоар за електрофореза на целулоза ацетатDYY-2CиDYY-6Cнапојување.

Во меѓувреме, биотехнологијата Beijing Liuyi обезбедува целулоза ацетатна мембрана за клиентите, а големината на мембраната на целулоза ацетат може да се прилагоди. Добредојдовте да побарате од нас примероци и повеќе информации.

Брендот Beijing Liuyi има повеќе од 50-годишна историја во Кина и компанијата може да обезбеди стабилни и висококвалитетни производи низ целиот свет. Низ годините на развој, тој е достоен за ваш избор!

Сега бараме партнери, добредојдени се и OEM резервоарот за електрофореза и дистрибутерите.

Доколку имате некаков план за купување на нашите производи, не двоумете се да не контактирате. Можете да ни испратите порака на е-пошта[заштитена е-пошта]или[заштитена е-пошта], или ве молиме јавете ни се на +86 15810650221 или додадете Whatsapp +86 15810650221, или Wechat: 15810650221