Минатата недела споделивме неколку размислувања за користење на електрофореза на мембрана на целулоза ацетат, и ќе ја завршиме оваа тема овде денес за ваша референца.
Избор на Концентрација на пуфер
Концентрацијата на пуфер што се користи во електрофорезата на мембраната на целулоза ацетат е генерално помала од онаа што се користи во електрофорезата на хартија.Најчесто користената pH вредност 8,6Bарбиталниот пуфер обично се избира во опсег од 0,05 mol/L до 0,09 mol/L.При изборот на концентрацијата се врши прелиминарно определување.На пример, ако должината на мембранската лента помеѓу електродите во комората за електрофореза е 8-10 cm, потребен е напон од 25 V по сантиметар од должината на мембраната, а интензитетот на струјата треба да биде 0,4-0,5 mA по сантиметар од ширината на мембраната.Доколку овие вредности не се постигнат или надминат за време на електрофорезата, концентрацијата на пуферот треба да се зголеми или разреди.
Премногу ниската концентрација на тампон ќе резултира со брзо движење на лентите и зголемување на ширината на лентата.Од друга страна, претерано високата тампон концентрација ќе ја забави миграцијата на бендот, што ќе го отежне разликувањето на одредени појаси за одвојување.
Треба да се забележи дека при електрофорезата на мембраната на целулоза ацетат, значителен дел од струјата се спроведува низ примерокот, што генерира значителна количина на топлина.Понекогаш, избраната концентрација на пуфер може да се смета за соодветна.Меѓутоа, во услови на зголемена температура на околината или кога се користи повисок напон, испарувањето на водата поради топлината може да се интензивира, што резултира со претерано висока концентрација на пуфер, па дури и да предизвика сушење на мембраната.
Волумен на примерок
Во електрофорезата на мембраната на целулоза ацетат, количината на волуменот на примерокот се одредува од различни фактори, вклучувајќи ги условите за електрофореза, својствата на самиот примерок, методите на боење и техниките за откривање.Како општ принцип, колку е почувствителен методот на откривање, толку може да биде помал волуменот на примерокот, што е поволно за одвојување.Ако волуменот на примерокот е прекумерен, шемите на електрофоретско одвојување може да не се јасни, а боењето исто така може да одземе време.Меѓутоа, кога квантитативно се анализираат раздвоените обоени ленти со користење на методи за откривање на колориметрија со елуција, волуменот на примерокот не треба да биде премногу мал, бидејќи може да резултира со помали вредности на апсорпција за одредени компоненти, што ќе доведе до повисоки грешки во пресметувањето на нивната содржина.Во такви случаи, волуменот на примерокот треба соодветно да се зголеми.
Вообичаено, волуменот на мострата додаден на секој сантиметар од линијата за примена на примерокот се движи од 0,1 до 5 μL, што е еквивалентно на количина на примерок од 5 до 1000 μg.На пример, при рутинска анализа на електрофореза на серумски протеини, волуменот на примерокот додаден на секој сантиметар од линијата за апликација генерално не надминува 1 μL, што е еквивалентно на 60 до 80 μg протеин.Меѓутоа, кога се анализираат липопротеини или гликопротеини со користење на истиот метод на електрофореза, волуменот на примерокот треба соодветно да се зголеми.
Како заклучок, најсоодветниот волумен на примерокот треба да се избере врз основа на специфични услови преку серија прелиминарни експерименти.
Избор на раствор за боење
Одделените ленти во електрофорезата на мембраната на целулоза ацетат обично се обоени пред откривање.Различните компоненти на примерокот бараат различни методи на боење, а методите за боење погодни за електрофореза на мембрана на целулоза ацетат можеби не се целосно применливи за филтер-хартија.
Постојат три главни принципи за избор на раствор за боењецелулоза ацетатна мембрана.Прво,Боите растворливи во вода треба да се претпочитаат над боите растворливи во алкохол за да се избегне собирање и деформација на мембраната предизвикана од растворот за боење на вториот.По боењето, важно е да се исплакне мембраната со вода и да се минимизира времетраењето на боењето.Во спротивно, мембраната може да се завитка или да се намали, што би влијаело на последователното откривање.
Второ, се претпочита да се изберат бои со силен афинитет за боење за примерокот.Во електрофорезата на мембранската целулоза ацетатна мембрана на серумските протеини, вообичаено се користи амино црна 10B поради неговиот силен афинитет за боење за различни компоненти на серумските протеини и неговата стабилност.
Трето, треба да се изберат сигурни квалитетни бои.Некои бои, и покрај тоа што го имаат истото име, може да содржат нечистотии што резултираат со особено темна позадина по боењето.Ова дури може да ги замагли првично добро одвоените ленти, што ги отежнува разликувањето.
И на крај, важен е изборот на концентрацијата на растворот за боење.Теоретски, може да изгледа дека поголема концентрација на растворот за боење ќе доведе до потемелно боење на компонентите на примерокот и подобри резултати од боење.Сепак, тоа не е така.Врзувачкиот афинитет помеѓу компонентите на примерокот и бојата има одредена граница, која не се зголемува со зголемувањето на концентрацијата на растворот за боење.Напротив, претерано високата концентрација на растворот за боење не само што ја троши бојата туку и го отежнува постигнувањето јасна позадина.Освен тоа, кога интензитетот на бојата достигнува одредена максимална вредност, кривата на апсорпција на бојата не следи линеарна врска, особено во квантитативните мерења. При електрофорезата на мембрана на целулоза ацетат, концентрацијата на растворот за боење е генерално помала од онаа што се користи во електрофорезата на хартија.
Детали за да знаете за биотехнологијата на Пекинг Лиуи's целулоза ацетатна мембранаРезервоарот за електрофореза и неговата апликација за електрофореза, посетете ја овде:
лЕксперимент за одвојување на серумскиот протеин со целулоза ацетатна мембрана
лЕлектрофореза на мембрана на целулоза ацетат
Доколку имате некаков план за купување на нашите производи, не двоумете се да не контактирате.Можете да ни испратите порака на е-пошта[заштитена е-пошта]или[заштитена е-пошта], или ве молиме јавете ни се на +86 15810650221 или додадете Whatsapp +86 15810650221, или Wechat: 15810650221.
Референца:Електрофореза (второ издание) од г-дин Ли
Време на објавување: Јуни-06-2023 година